Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

см. также основную статью Ретикулоциты

Метод подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества, однако он возможен только при наличии люминесцентного микроскопа и специальных красителей, в связи с чем доступен лишь немногим лабораториям.

Принцип подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии

Использование способности субстанции ретикулоцитов флюоресцировать после обработки крови акридиновым оранжевым.

Реактивы

1. Раствор акридинового оранжевого на изотоническом растворе хлорида натрия в концентрации 1:5000. Для приготовления изотонического раствора рекомендуют использовать дистиллированную воду pH 5,8 – 6,8. Раствор акридинового оранжевого должен быть свежим; хранят его не более 3 – 5 дней в темном флаконе с притертой пробкой.
2. Нефлюоресцирующее иммерсионное масло. Можно использовать афлуоль или обычное иммерсионное масло с флюоресценцией, погашенной нитробензолом (0,3 мл нитробензола на 1 мл масла). Ю.Н. Зубжицкий в качестве нефлюоресцирующего масла предлагает использовать перегнанный анизол.

Специальное оборудование

Микроскоп ультрафиолетовый МУФ-3М или люминесцентный.

Ход определения

Кровь смешивают с акридиновым оранжевым в пробирке или смесителе в соотношении 1 часть крови и 10 частей краски (смесь можно хранить не более 5 часов). Смесь перемешивают в течение 2 минут, каплю смеси наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. При этом жидкость не должна выходить за пределы покровного стекла. Микроскопируют с помощью светофильтра ЖС-17. В препарате эритроциты имеют темно-зеленые очертания и не флюоресцируют, а в ретикулоцитах зернисто-сетчатая субстанция светится ярко-красным цветом, благодаря чему ретикулоциты легко подсчитать. Замечено, что в крови, стабилизированной гепарином или цитратом натрия, флюоресценции ретикулоцитов не наблюдается.

Подсчитывают 1000 клеток (эритроцитов и ретикулоцитов), подобно подсчету ретикулоцитов в мазках, после окраски специальными красителями. Результат выражают в процентах или промилле.

Клиническое значение определения количества ретикулоцитов.

Литература:

• Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под редакцией Меньшикова В. В. - Москва, "Медицина", 1987 г
• Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под редакцией Кост Е. А. - Москва, "Медицина", 1975 г.